慢病毒包裝的詳細資料：

慢病毒包裝： 
慢病毒載體（Lentiviral vector, LVs）是在HIV-1病毒基礎上改造而成的病毒載體系統，它能高效的將目的基因（或RNAi）導入動物和人的原代細胞或細胞系。慢病毒載體基因組是正鏈RNA，其基因組進入細胞后，在細胞漿中被其自身攜帶的反轉錄酶反轉為DNA，形成DNA整合前復合體，進入細胞核后，DNA整合到細胞基因組中。整合后的DNA轉錄mRNA，回到細胞漿中，表達目的蛋白；或產生RNAi干擾。
慢病毒載體介導的基因表達或RNAi干擾作用持續且穩定，原因是目的基因整合到宿主細胞基因組中，并隨細胞基因組的分裂而分裂。另外，慢病毒載體能有效感染并整合到非分裂細胞中。以上特性使慢病毒載體與其它病毒載體相比，比如不整合的腺病毒載體、整合率低的腺相關病毒載體、只整合分裂細胞的傳統逆轉錄病毒載體，有鮮明的特色。大量文獻研究表明，慢病毒載體介導的目的基因長期表達的組織或細胞包括腦、肝臟、肌肉、視網膜、造血干細胞、骨髓間充質干細胞、巨噬細胞等。
慢病毒載體不表達任何HIV-1蛋白，免疫原性低，在注射部位無細胞免疫反應，體液免疫反應也較低，不影響病毒載體的第2次注射。

慢病毒包裝的優點：

1、能將外源基因有效整合入宿主染色體，外源基因表達水平較高、表達穩定；

2、廣泛的宿主，可感染分裂和不分裂的細胞，幾乎可以感染所有類型的細胞，特別適合質粒載體轉染效率低的細胞；

3、適用范圍廣，可用于體外細胞系和活體動物模型，研究基因和RNAi等；

4、轉導效率高，不需要轉染試劑，目的基因整合到宿主細胞基因組的概率大大增加。

科佰生物擁有豐富的病毒包裝經驗，成功為很多客戶包裝出需要的病毒，并且完成相應的功能檢測。

慢病毒概述：

慢病毒( Lentivirus)屬于逆轉錄病毒科(Retroviridae)，為RNA病毒，如人免疫缺陷病毒(HIV)、貓免疫缺陷病毒(FIV)、猿免疫缺陷病毒(SIV)、牛免疫缺陷病毒等。由于對HIV-1的研究較廣泛深入，對其生物學特性較為了解，因此HIV-1來源的慢病毒載體已成為其中的代表。

HIV-1為雙鏈RNA病毒，共有9個基因，如圖1所示。gag、pol、env3個基因編碼病毒的基本結構，tat、rev為調節基因，vif、vpr、vpu、nef 4個為輔助基因。其中，gag基因編碼病毒的核心蛋白，包括基質蛋白、衣殼蛋白、核衣殼蛋白；pol基因編碼病毒復制所需的酶，如反轉錄酶、整合酶、蛋白酶，env基因編碼病毒的包膜糖蛋白，決定病毒感染宿主的靶向性。rev編碼的蛋白調節gag、pol、env的表達水平，tat編碼的蛋白參與RNA轉錄的控制。4個輔助基因編碼的蛋白則作為毒力因子參與宿主細胞的識別和感染。兩端為長末端重復序列（LTR），內含復制所需的順式作用元件，如包裝信號元件Ψ。

*代慢病毒載體系統是以三質粒系統為代表，該系統由包裝質粒、包膜質粒及載體質粒3種質粒組成。包裝質粒是HIV-1前病毒基因組5’端LTR由巨細胞病毒早期啟動子取代，3’LTR由SV40 polyA序列取代。包裝成分分別構建在兩個質粒上，一個表達gag和pol，另一個表達env。載體質粒攜帶了5’端LTR，和全部5’端非翻譯區域，另外還帶有rev應答元件（RRE）。包膜表達質粒使用水皰性口炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)用來代替了原病毒的env基因。

第二代慢病毒載體系統是在*代的基礎上進行改進，在包裝質粒中刪除了HIV的所有輔助基因（vif、vpr、vpu和nef基因）。這些附屬基因的去除并不影響病毒的滴度和感染能力，同時增加了載體的安全性。

第三代慢病毒載體系統由四質粒代替原有的三質粒包裝系統。將rev基因單獨放在一個包裝質粒上。同時又增加了兩個安全特性：一是構建自身失活的慢病毒載體，即刪除了U3區的3′LTR，使載體失去HIV-1增強子及啟動子序列，即使存在所有的病毒蛋白也不能轉錄出RNA；二是去除了tat基因，用異源啟動子序列代替，這樣原始的HIV-1基因組中的9個慢病毒載體中只保留了3個(gag、pol和rev)。因此第三代慢病毒載體系統更加安全。

技術路線：

1.獲得目的基因序列；

2.構建慢病毒載體；

3.重組質粒和包裝質粒共轉，包裝病毒；

4.病毒純化、濃縮；

5.滴度測定。

6.對照組和實驗組感染細胞，利用抗生素篩選，得到穩定單克隆細胞株（可選）。

案列展示：

服務說明:

1.客戶提供目的基因的序列，如果提供模板，請告知載體、酶切穩點等信息；

2.若實驗材料為原代細胞或者特殊培養的細胞，請先咨詢；

3.公司默認提供病毒滴度為1x10⁷-1x10⁸TU/ml,規格1ml；

4.目的蛋白的功能驗證另外收費。

提交的產品和資料:

1.實驗報告；

2.構建好的病毒重組質粒；

3.提供至少1ml滴度＞1x10⁸-1x10⁹TU/m的病毒.